单核细胞增生李斯特菌非编码RNA rli87基因缺失株的构建、鉴定及其生长特性初步研究

doi:10.11843/j.issn.0366-6964.2015.06.016

畜牧兽医学报 ›› 2015, Vol. 46 ›› Issue (6): 998-1003.doi: 10.11843/j.issn.0366-6964.2015.06.016

单核细胞增生李斯特菌非编码RNA rli87基因缺失株的构建、鉴定及其生长特性初步研究

谢堃¹，乔军^1* ，孟庆玲¹，彭叶龙¹，赵海龙¹，马玉¹，陈诚¹，才学鹏²，陈创夫¹

（1.石河子大学动物科技学院，动物疾病防控兵团重点实验室，石河子 832003；2.中国农业科学院兰州兽医研究所，家畜疫病病原生物学国家重点实验室，兰州 730046 ）

收稿日期:2014-09-01 出版日期:2015-06-23 发布日期:2015-06-23
通讯作者: 乔军，Tel：+86-993-2055036；E-mail：qj710625@163.com
作者简介:谢堃（1990-），女，硕士生，主要从事病原分子生物学研究，E-mail：xiekuns@gmail.com
基金资助:
国家国际科技合作专项（2014DFR31310）；国家自然科学基金（30960274；31360596）

Construction，Identification of ncRNA rli87 Gene Deletion Strains Listeria monocytogenes and Its Growth Characteristics

XIE Kun¹，QIAO Jun^1* ，MENG Qing-ling¹，PENG Ye-long¹，ZHAO Hai-long¹，MA Yu¹，CHEN Cheng¹，CAI Xue-peng²，CHEN Chuang-fu¹

(1.Key Laboratory of Prevention and Control of Animal Disease，College of Animal Science and Technology，Shihezi University，Shihezi 832003，China；2.Key Laboratory of National Veterinary Etiological Biology，Lanzhou Veterinary Research Institute，Chinese Academy of Agricultural Sciences，Lanzhou 730046，China)

Received:2014-09-01 Online:2015-06-23 Published:2015-06-23

摘要/Abstract

摘要：

拟构建单核细胞增生李斯特菌（LM）非编码RNA ril87基因缺失株，对其进行分子鉴定，分析rli87基因缺失对LM生长的影响。用融合PCR方法构建LM-SB5 rli87基因缺失突变体，并构建pKSV7-Δrli87穿梭载体，将其转化入LM-SB5感受态细胞，利用温度（42 ℃）和氯霉素（10 μg•mL^-1）的抗性双重压力来实现同源重组，筛选同源重组菌进行分子鉴定，测定缺失株与母源野毒株37 ℃条件下生长曲线。结果显示：PCR和测序结果证实成功获得了LM-Δrli87重组菌。通过25代的连续传代，PCR鉴定结果显示，该缺失株具有良好的遗传稳定性。与野毒株进行对比，在37 ℃条件下缺失株与野毒株的生长差异不显著（P>0.05）。非编码RNA rli87基因在37 ℃条件下对LM生长没有明显的调控作用。

Abstract:

In this study，non-coding RNA rli87 gene deletion strain of LM was constructed and identified，and growth characteristics of deletion strain was studied.The rli87 gene deletion mutant was constructed by fusion PCR method，and then pKSV7-Δrli87 shuttle vector was constructed，which was transformed into competent cells LM-SB5.Homologous recombination was conducted using temperature (42 ℃) and chloramphenicol (10 μg•mL^-1) resistance to achieve the rli87 gene deletion strain，and growth curves of wild strain and deletion strain were assayed at 37 ℃.The PCR and sequencing results confirmed that LM-Δrli87 was successfully obtained.PCR identification results showed that the deletion strain has good genetic stability through 25 generations of continuous passage.Comparison with the wild strain，there was no significant difference (P>0.05) in growth between deletion mutant and wild strain at 37 ℃.The results suggest that rli87 gene did not play significant role in regulatory growth under the conditions of 37 ℃.

中图分类号:

S852.61

谢堃，乔军，孟庆玲，彭叶龙，赵海龙，马玉，陈诚，才学鹏，陈创夫. 单核细胞增生李斯特菌非编码RNA rli87基因缺失株的构建、鉴定及其生长特性初步研究[J]. 畜牧兽医学报, 2015, 46(6): 998-1003.

XIE Kun，QIAO Jun，MENG Qing-ling，PENG Ye-long，ZHAO Hai-long，MA Yu，CHEN Cheng，CAI Xue-peng，CHEN Chuang-fu. Construction，Identification of ncRNA rli87 Gene Deletion Strains Listeria monocytogenes and Its Growth Characteristics[J]. ACTA VETERINARIA ET ZOOTECHNICA SINICA, 2015, 46(6): 998-1003.

0
/ / 推荐

导出引用管理器 EndNote|Reference Manager|ProCite|BibTeX|RefWorks

链接本文: https://www.xmsyxb.com/CN/10.11843/j.issn.0366-6964.2015.06.016

https://www.xmsyxb.com/CN/Y2015/V46/I6/998

参考文献

［1］陆承平.兽医微生物学［M］.3版.北京：中国农业出版社，2001.
LU C P.Veterinary Microbiology ［M］.3rd.Beijing ：Chinese Agricultural Press，2001.(in Chinese)
［2］CHRISTIANSEN J K，NIELSEN J S，EBERSBACH T，et al.Identification of small Hfq-binding RNAs in Listeria monocytogenes［J］. RNA，2006，12(7)：1383-1396.
［3］IZAR B，MRAHEIL M A，HAIN T.Identification and role of regulatory non-coding RNAs in Listeria monocytogenes［J］.Int J Mol Sci，2011，12(8)：5070-5079.
［4］WANG K C，CHANG H Y.Molecular mechanisms of long noncoding RNAs ［J］.Mol Cell，2011，43(6)：904-914.
［5］高原，惠宁，刘善荣.长链非编码RNA的研究进展［J］.第二军医大学报，2011，32(7)：790-794.
GAO Y，HUI N，LIU S R.Long non-coding RNA：research progress［J］.Academic Journal of Second Military Medical University，2011，32(7)：790-794.(in Chinese)
［6］MELLIN J R，COSSART P.The non-coding RNA world of the bacterial pathogen Listeria monocytogenes［J］.RNA Biol，2012，9(4)：372-378.
［7］HÄSLER R，JACOBS G，TILL A，et al.Microbial pattern recognition causes distinct functional micro-RNA signatures in primary human monocytes ［J］.PLoS One，2012，7(2)：e31151.
［8］MRAHEIL M A,BILLION A,KUENNE C,et al.Comparative genome-wide analysis of small RNAs of major Gram-positive pathogens：from identification to application ［J］. Microb Biotechnol，2010，3(6)：658-676.
［9］ZHANG Z C，MENG Q L，QIAO J，et al.RsbV of Listeria monocytogenes contributes to regulation of environmental stress and virulence［J］.Arch Microbiol，2013，195(2)：113-120.
［10］SIEVERS S，LILLEBAEK E M S，JACOBSEN K，et al.A multicopy sRNA of Listeria monocytogenes regulates expression of the virulence adhesin LapB［J］.Nucleic Acids Res，2014，42(14)：9383-9398.
［11］TOLEDO A A，DUSSURGET O，NIKITAS G，et al.The Listeria transcriptional landscape from saprophytism to virulence［J］.Nature，2009，459(7249)：950-956.
［12］乔军，孟庆玲，陈创夫，等.塔里木马鹿单核细胞增多性李氏杆菌的分离与鉴定［J］.中国农学通报，2008，24(1)：9-12.
QIAO J，MENG Q L，CHEN C F，et al.Isolation and identification of wild strain of Listeria monocytogenes in Tarim Wapiti［J］.Chinese Agricultural Science Bulletin，2008，24(1)：9-12.(in Chinese)
［13］GEORG J，HESS W R.Cis-antisense RNA，another level of gene regulation in bacteria［J］.Microbiol Mol Bio Rev，2011，75(2)：286-300.
［14］郭宏华，贾芙蓉，韩晓英，等.单核细胞增生性李斯特菌研究进展［J］.中国实验诊断学，2013，17(1)：197-199.
GUO H H，JIA F R，HAN X Y，et al.Advance in the research of Listeria monocytogenes［J］.Chinese Journal of Laboratory Diagnosis，2013，17(1)：197-199.(in Chinese)
［15］PEREZ J T，VARBLE A，SACHIDANANDAM R，et al.Influenza A virus-generated small RNAs regulate the switch from transcription to replication［J］.Proc Natl Acad Sci USA，2010，107(25)：11525-11530.
［16］RAASCH P，SCHMITZ U，PATENGE N，et al.Non-coding RNA detection methods combined to improve usability，reproducibility and precision［J］.BMC Bioinformastic，2010，11：491.
［17］EULALIO A，SCHULTE L，VOGEL J.The mammalian microRNA response to bacterial infections［J］.RNA Biol，2012，9(6)：742-750.
［18］孟庆玲，乔军，才学鹏，等.单核细胞增多性李氏杆菌野毒株 InlB 的分子特征及其表达和纯化研究［J］.微生物学报，2007，47(6)：1098-1101.
MENG Q L，QIAO J，CAI X P，et al.Molecular characteristics of InlB protein of Listeria monocytogenes wild strain and it’s expression and purification［J］.Acta Microbiologica Sinica，2007，47(6)：1098-1101.(in Chinese)
［19］张小娟，张荣光.影响电穿孔法转化效率的因素［J］.医学综述，2011，17(5)：666-668.
ZHANG X J，ZHANG R G.Factors which influence the efficiency of electroporation［J］.Medical Recapitulate，2011，17(5)：666-668.(in Chinese)

[1]	吕若一, 司晓慧, 孙志刚, 史晓敏, 刘晓晔. 猪链球菌耐药现状分析及感染防控措施[J]. 畜牧兽医学报, 2023, 54(12): 4920-4933.
[2]	支岩, 梅晨, 刘珍邑, 乌云格日乐, 王宏俊, 胡格. 副鸡禽杆菌毒力因子研究进展[J]. 畜牧兽医学报, 2023, 54(12): 4934-4942.
[3]	王佳宁, 张自强, 孔德婧, 冯彩彩, 张飞可, 刘玉梅. 家兔肺炎克雷伯菌的分离鉴定[J]. 畜牧兽医学报, 2023, 54(12): 5198-5206.
[4]	李莉莉, 陈凯风, 陈兵, 周洲平, 王南威, 瞿孝云, 徐成刚, 廖明, 张建民. STM1827在鼠伤寒沙门菌生物被膜形成及环境应激中的调控作用[J]. 畜牧兽医学报, 2023, 54(12): 5207-5217.
[5]	杨梦林, 郑世奇, 彭凯, 王玮, 黄燕华, 彭杰. 鸽源鼠伤寒沙门菌的分离鉴定及致病性分析[J]. 畜牧兽医学报, 2023, 54(11): 4880-4888.
[6]	武周慧, 王瑜, 杜衡, 王之文, 肖爽, 武金亮, 王真. 替拉扎明对多重耐药沙门菌抗菌增敏活性分析[J]. 畜牧兽医学报, 2023, 54(10): 4362-4371.
[7]	刘鑫欢, 恽佳蕾, 毛立, 李基棕, 郝飞, 何苗锋, 杨蕾蕾, 张纹纹, 程子龙, 孙敏, 刘茂军, 王少辉, 白娟, 李文良. 羊腹泻样本中大肠杆菌的分离、毒力基因与耐药性分析[J]. 畜牧兽医学报, 2023, 54(8): 3445-3454.
[8]	胡秀花, 孙芷馨, 赵梦洋, 谢佳琪, 王敏, 陈海良, 葛昕, 刘天龙, 王少林. 野生松鼠源屎肠球菌的致病性与耐药性分析[J]. 畜牧兽医学报, 2023, 54(7): 3012-3021.
[9]	赵菲菲, 李杰, 韩宁, 谢仕廷, 曾振灵. 分离自屠宰场的肺炎克雷伯菌的耐药性分析[J]. 畜牧兽医学报, 2023, 54(7): 3044-3053.
[10]	陈松彪, 尚珂, 杜付熙, 余祖华, 李静, 贾艳艳, 廖成水, 张春杰, 丁轲, 程相朝. 沙门菌VI型分泌系统组装、结构特征和分泌调控网络的研究进展[J]. 畜牧兽医学报, 2023, 54(6): 2252-2263.
[11]	曾成容, 王娜, 毕文文, 梅世慧, 何广霞, 张峻杰, 陈泽, 文明, 周碧君. A型产气荚膜梭菌感染鸭回肠代谢组学分析[J]. 畜牧兽医学报, 2023, 54(6): 2555-2569.
[12]	李蔚, 张强, 瞿嘉豪, 吴亚平, 胡若辰, 贾若艺, 郭如海, 马清义, 潘广林, 王兴龙. 大熊猫肠道菌群年龄演替规律分析[J]. 畜牧兽医学报, 2023, 54(6): 2619-2630.
[13]	翟云逸, 袁野, 李俊玫, 田路路, 刁梓洋, 李彬, 陈家露, 周栋, 靳亚平, 王爱华. 布鲁氏菌外膜蛋白16单克隆抗体的制备及初步应用[J]. 畜牧兽医学报, 2023, 54(5): 2083-2091.
[14]	田艳红, 于江旭, 焦宇洲, 高东阳, 蔡旭旺. 沙门菌脂多糖的结构修饰及其效应的研究进展[J]. 畜牧兽医学报, 2023, 54(4): 1392-1402.
[15]	陈烨馨, 谢梦圆, 李文豪, 张志丹, 王晓丹, 陈柯佳, 刘平平, 周伟光, 王建龙, 徐晓静. 牛轮状病毒和志贺菌阳性犊牛腹泻粪便样本中肠道菌群的分析[J]. 畜牧兽医学报, 2023, 54(4): 1624-1631.

单核细胞增生李斯特菌非编码RNA rli87基因缺失株的构建、鉴定及其生长特性初步研究

Construction，Identification of ncRNA rli87 Gene Deletion Strains Listeria monocytogenes and Its Growth Characteristics

RichHTML

PDF

可视化

摘要/Abstract

引用本文

使用本文

参考文献

相关文章 15

编辑推荐

Metrics

本文评价